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细 🐒 胞脂质抽提步骤：
材料：细胞 🐺 培 🌷 养 🕷 物
氯仿 🐘 甲 ☘ 醇溶 🐶 液 (2:1 v/v)
盐水 🐠 (0.9% NaCl)
乙酸 (可选 🦁 ，用于中和)
氮气 (可选，用于 🐱 干燥样 🐯 品)
离心机玻 🐠 璃 🐎 离心管 🦢
移液器1. 收集细胞收集： 待测细 🌸 胞培养物并离心以收集细胞。将细胞悬浮在 PBS 溶。液 🐅 中
2. 裂解细胞： 加入适当体积的氯仿甲醇溶液 (2:1 v/v) 并涡旋混匀。此。步骤将裂解 🐘 细胞并释放脂质
3. 分相： 用等体积的盐水冲洗混合物，并剧烈涡旋 🐎 30 秒。静置分 10 钟，让混合物分。两相，下。层为氯仿相富 🌵 含脂质 ☘
4. 收 🐝 集脂质相： 小心移 🐋 除并收集下层的氯仿相。如果需要，可以重复步骤 3 和以 4 提。高脂质提取率 🐯
5. 洗涤： 将收集的氯仿 🦅 相转移到一个新的离心管中，并用盐水洗涤两次。此。步骤将去 🌲 除剩余的细胞碎片和盐分
6. 干燥： 使用氮气流或真空泵干燥氯仿相。确 🐬 。保完全干燥以去除所有溶剂
可选步骤：中和： 在干燥前，可以使 🐵 用乙酸中 🌸 和氯仿相以去除任何 🌾 残留的盐分。
定量 🕸 脂质： 在收集 🐡 并干燥脂质相后，可，以使用各种方法对其进行 🐛 定量分析例如比色法或光谱法。
注意事项：氯仿是一种有毒且易燃的溶剂。在通风良好的区 🐞 域进行操作，并。佩戴适当的个人防护装 🦄 备
确保在 🌻 每一步都彻底混合，以最大限度地提 🌵 高脂质提取率 🌹 。
在收 🐦 集氯仿相时要小心 🌹 ，避免混入盐 🦁 水相。
干燥脂质相时要小心 🦢 ，避，免过度干燥 🕊 这可能会导致脂质 degradation。
细胞脂质 🌾 抽提 🦄 操作 🌴
所需材料：细胞沉淀 🐳 物
氯仿：甲醇混合液（2:1，体积 🐠 比）
盐水 🐋 （0.9% NaCl）
冷乙醚无水硫酸钠 🦅
氮气1. 细 🦁 胞 🦊 破 🦊 裂：
将细胞沉淀物悬 🐎 浮在氯仿：甲醇混合液中（约 🐡 细胞 1 mL/10^7 ）。
强烈涡旋 30 秒，然后再冰浴中放置 🐳 510 分钟 🐶 。
离心 🌵 5 分钟，10,000 × g，4°C。
2. 相 🐟 分离：
将上层清液转移到 🦍 一个新试管中。
加入等体积的 💮 盐 🦉 水。
涡 🌾 旋 🐕 并 🐛 离心 5 分钟，10,000 × g，4°C。
收集上 🐧 层清 💐 液 🕷 （脂质相）。
3. 脂质洗涤 🍁 ：
将收集的脂质相 🍀 转移到一个新试管中。
加入两倍体积 🌲 的冷乙醚。
涡旋并离心 5 分钟 🌷 ，10,000 × g，4°C。
收集 🐦 上层清液 💮 （脂质 🐠 相）。
4. 无水处 🌳 理 🐕 ：
将脂质相 🍀 转移到一个含有无水硫酸钠的试管中。
充 🕊 分 🌴 涡 🦄 旋，静置分 5 钟。
离 🐺 心 🐳 5 分钟 🐦 ，10,000 × g，4°C。
取出上层 🐴 清液（无 🐯 水脂 🐝 质提取物）。
5. 氮气 💮 蒸发：
将无水脂质提取物转移到一 🌲 个玻璃 🌿 离心管中 🐠 。
用氮气吹扫直至干燥（大约需要 12 小时 💐 ）。
提示：在整个操 🕷 作 🐶 过程中务必保 🐼 持样品处于低温（4°C）。
避免 🦈 使用塑料器皿，因为它们可能会与脂质相互 🦢 作用。
脂质提取物可以 🐎 用氯仿或甲醇溶解 🕸 ，并保存在 80°C。
细 🦅 胞脂质 🐺 抽提技 🕸 术
材料：磷酸盐缓冲 🐴 液 🐅 (PBS)
甲醇玻璃试管或离心管 🐧
漩 🐧 涡振荡器 🐧
蒸汽浴室或氮 🐠 气吹拂器 🦢
步骤：1. 收集细胞样 🦟 本 🌹
收集待 🐝 分析的细胞 🌸 样本。
用 PBS 洗涤细胞两次，以去除培养基残留 🌺 物。
2. 细胞裂 🦍 解
在 PBS 中重 🐛 悬细胞，直到达到所需的浓度（通常为 1 x 10^6 个细胞/毫升）。
加入甲醇，与 PBS 的体 🍁 积比为 1:1。
涡旋振荡 30 秒，然后在 4°C 下 30 孵育 🦢 分钟。
3. 氯仿 🐶 提 🐶 取
加入氯仿，与甲醇的体积比 🐕 为 2:1。
涡旋振 🦈 荡 30 秒，然后 🌼 在 🕷 4°C 下 30 孵育分钟。
离 🦈 心 10 分 🕊 钟，10,000 x g，4°C。
4. 分相离心后，将形成三层：上，层，为含水相 🐺 中层 🐯 为含脂质的氯仿相下层为含蛋白的沉淀 🐡 物相。
5. 收集 🌹 氯 🐴 仿相
小心移取中 🐈 层氯仿相，避免混入 🐵 其他层。
将氯仿相转移 🦟 到新的试管或离 🐒 心 🐅 管中。
6. 洗涤和脱 ☘ 水 🕷
在氯仿相中 💮 加入等 🦊 量的去离子水。
涡旋振荡 30 秒 🦁 ，然后在 4°C 下孵育 🐳 10 分钟。
再次离心 10 分 🐡 钟，10,000 x g，4°C。
收集氯仿相并重复洗 🌹 涤和脱水步骤两次。
7. 蒸发 🦉 溶剂
使用蒸汽浴室 🐒 或氮气吹拂器蒸发氯仿溶剂。
蒸 ☘ 发后，将剩余的脂质转移到称重 🦊 的样品瓶中 🌼 。
8. 称重称重样 🦍 品瓶及其 🌴 中的脂质 🦆 。
从原样品瓶的重量 🕊 中减去样品瓶本身的重量，得到脂质的重量。
9. 计 🍁 算脂质含量
使用以下公式计算脂 🐠 质含量：
脂质含 💮 量脂质 = 重量 / 细胞 🐵 样本 🐘 重量
脂质 🐋 进入细胞的方式：
1. 被动扩 ☘ 散：
小脂质分子（如甘 🐟 油三酯脂、肪酸）可 🐬 以通过双分子层的 🦍 疏水性部分直接进入细胞。
2. 主动运输 🪴 ：
某些脂质分子（如胆固醇、磷脂）不能直接穿过双分子层。它。们需要跨膜蛋白的协助 🌵 才能进 🌾 入细胞
3. 脂 🌲 蛋白介导的运输：
脂质溶解性差，因此它们在血液中与脂蛋白结合形成脂蛋白颗粒脂蛋白颗粒。可，以与。细胞表面的受 🌹 体结 🐋 合通过内吞作用将脂质运送至细胞内
4. 内 🦍 吞作 💮 用：
细胞膜包裹脂蛋白颗粒或其 🐛 他含有脂质的颗粒，形成内吞小体内吞小体。与，溶。酶体融合释放脂质
5. 胞 🌾 吐 🦢 作用 🌹 ：
某些细胞（如巨噬细胞）可以通过胞吐作用 🕷 摄取脂质细胞。膜向外延伸并包裹脂质，形。成胞吐，小。体胞吐小体与溶酶体融合释放脂质
具体脂质进 💐 入细胞的方式取决于脂质 🌴 的性质细胞、类型和受表达的 🕸 受体。